動力學研究指引 | 結合動力學與 WAVE system. Download now
Download now即便是面對最具挑戰性的樣品,也能取得卓越的親和力和動力學數據
結合動力學說明兩個分子之間的動態結合交互作用,一般表示方式為:ka (締合的速率)、kd (解離的速率) 和 KD (平衡解離常數,又稱為「親和力」)。ka (也可使用 kon 表示) 說明所研究的分子形成複合體的速率。kd (也可使用 koff 表示),則說明該複合體衰變的速率。KD 計算為 kd/ka,可判斷平衡時分析物佔用半數配體之際的分析物濃度。
準確且有效測量分子間的交互作用和結合事件,對所有類型的基礎研究都非常關鍵,更是藥物開發計畫中不可或缺的一大環節。
WAVEsystem (一種 Creoptix 技術) 可提供高樣本處理量、自動化、無阻塞、免標記的動力學量測。即便處理最具挑戰性的樣本,也能取得卓越的親和力和動力學數據。
可使用標記分子 (放射性標記、螢光標記等) 執行生物分子結合檢定,但必須建立適當、不具破壞性的標記,且經常進行詳盡的洗滌和純化步驟。
在免標記量化研究中,將欲分析的分子之一固定化至表面 (配體),其他分子則游離於溶液中 (分析物)。
感應圖譜 (即時測量的圖形表示) 是顯示分析物與配體即時結合的一般研究。
影像 (右):一般感測圖譜可顯示相位基線、締合、解離並回到基線。
首先判斷基線,如感測圖譜所示。簡單來說,這是指只有配體的折射率。接著,在溶液中加入未結合分析物,並以折射率的變化測量締合 (結合) 數據。在締合 (結合) 完成後,去除含有未結合分析物的溶液並測量解離數據。雖然感測圖譜中的訊號等級與涉及的配體和分析物以及其交互作用的強度相關,但真正寶貴的資訊就在其締合與解離相位的曲率中。例如:所需的藥物生物作用與其滯留時間 (解離態) 有關,而非僅與其親和力有關。
以單一濃度注入單一分析物 (單一週期動力學) 進行測量分析雖然快速,但無法針對所有動力學參數提供可靠的估計值。一般來說,動力學是以多週期動力學實驗進行測量:可靠且詳盡的動力學分析需要至少四到六種分析物濃度的資料,廣度範圍則為預期 KD 的 0.1 至 10 倍。這需要在量測週期之間安插稀釋和解離的步驟。因此,多週期動力學相對耗時,並且不適合用來進行數千種候選複合物的篩選。
無再生動力學可略過再生步驟,因此能加快分析速度。但是,只有在分析物解離緩慢時,才可採用無再生動力學分析,因為此分析的基礎是建構在隨著分析物濃度提高的週期中,僅有少量分析物解離的條件下。我們開發了一套革命性的偵測方法:Repeated Analyte Pulses of Increasing Duration (持續時間延長的重覆分析物脈衝) - waveRAPID 可大幅縮短檢定時間和試劑消耗量,同時改善數據品質,不僅可加速識別藥物開發程序中的資訊,也能對相關量測結果更有信心。
waveRAPID 使用的是單一濃度分析物的脈衝,且會針對每個脈衝套用相應的持續時間。進一步瞭解我們如何協助您更快速輕鬆地取得動力學資料:新開發的 waveRAPID 方法及提供 1-click 式評量工具的 Direct Kinetics 軟體。
應用於藥物開發和生命科學產業或學術研究的新世代生物分析儀
在推出 WAVEsystem 之後,Malvern Panalytical 現在也提供研究即時結合動力學的光學生物感測器。
WAVEsystem 可用來解答非常多的科學問題。這當中包括判斷兩種分子是否有交互作用、分子的結合親和力 (KD) 為何,以及確認樣本中特定分析物的生物學活性濃度。
此外,WAVEsystem 可透過觀察分析物與配體的即時結合,來測量動力學反應參數,例如締合率常數 (ka) 及解離率常數 (kd)。
歡迎造訪我們的 GCI 技術相關頁面,瞭解使用專屬 GCI 技術的 WAVEsystem 在解析度的表現上為什麼優於傳統的表面電漿共振法 (SPR) 及生物膜干涉法 (BLI)。
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量測類型 | |
鍵結動力學 | |
鍵結親和力 | |
免標定分析 | |
技術類型 | |
光柵耦合干涉儀(GCI) | |
微流體 |