對快速解離速率具極準確的解析值,可大幅減少偽陽性誤判情形

在本技術說明中,我們將示範如何使用 Creoptix WAVE 來準確測量弱鍵結分子的快速解離速率動力學。晶片匣設計實現了 150 ms 的超快速切換時間,現在便可輕鬆發現低效價活性化合物,使藥物發現更容易成功。

摘要

在基於片段之篩檢資料庫所找到的弱鍵結化合物,通常是以親和力而非動力學來進行排序。這是因為標準儀器缺乏測量快速解離速率之化合物的能力。然而,測量親和力而非解離速率,可能會產生大量偽陽性誤判結果,進而擴大工作流程並產生不必要的成本。

採用專有光柵耦合干涉法 (GCI) 技術,Creoptix WAVE 能為高達 10s-1 的快速解離速率提供解析。如此一來,便能對真正的活性化合物實現準確的早期選定,大幅提高效率。 

透過測量甲基磺胺鍵結至碳酸酐酶 II 的動力學,我們說明了 Creoptix WAVEsystem 系統為快速解離速率實現卓越的分離解析,即使標的物與分析物有相當高的分子量比亦然。

動力學數據
Creoptix WAVE Biacore™ S51
kon (M-1 s-1) 9.36 x 103 kon (M-1 s-1)
8.05 x 103
koff (s-1) 2.86 koff (s-1)
2.21
KD (uM) 306 KD (uM) 274

表 1:Kinetic data compared to published data in Myszka, David G. “Analysis of small-molecule interactions using Biacore S51 technology.”Analytical biochemistry 329.2 (2004): 316-323.

圖例:(A) 甲基磺胺 (95.1 Da) 鍵結至碳酸酐酶 II (29 kDa) 的感應圖,透過與胺耦合固定在 WAVEchip PCH 流動式樣品載台流動式槽 1 的 8500 pg/mm2 上。數據在 40Hz 以 200 μl/min 的流動速率擷取。(B) 放大到結合階段 (左) 和解離階段 (右),下方個別的殘留物分佈圖顯示高度清晰的動力學分離解析。

[Figure 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg] Figure 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg

圖 1:甲基磺胺 (95.1 Da) 鍵結至碳酸酐酶 II (CAII)。1 pg/mm2 = 1 RU

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