凡是藉由增加或減低熱的方式監測樣本物理或化學屬性的儀器,都可以視為熱分析儀。在這類科學儀器中,使樣本暴露於溫度變化,可以改變其他物理特性,包括熔化、展開、結合、機械強度、組成、結晶或玻璃轉化、流變性質等。
有些熱分析儀器監測樣本溫度的變化幅度最低可達 0.000001°C 以下。這些細微的溫度變化可能是蛋白質兩種摺疊狀態之間的差異或晶體結構形成,且可能導致顯著不同的物理屬性,包括穩定性、毒性、黏彈性和傳導性等。
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熱分析儀 | 英文縮寫 | 熱量施加或監測 | 觀測屬性 | 推導屬性 |
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示差掃描熱分析儀 | DSC | 施加與監測 | 溫度 | 熔點 (Tm)
展開發生點 (Tonset) 焓 (∆H) 熱容 (ΔCp) |
等溫滴定熱分析儀 | ITC | 監測 | 溫度 | 結合常數 (KD)
化學計量 (n) 焓 (ΔH) 熵 (ΔS) 吉布氏自由能 (ΔG) |
示差掃描螢光法 | DSF | 施加 | 固有螢光特性 | 熔點 (Tm)
展開發生點 (Tonset) 轉化數 (n) 焓 (ΔH) 自由能 (ΔG)* |
熱重分析 | TGA | 施加 | 樣本質量 | 相轉化溫度
樣本質量變化 |
動態機械分析 | DMA | 施加 | 機械特性 | 剪切儲能模量與損耗模量 (G'、G'') |
熱傳導性分析儀 | TCA | 施加 | 傳導性 |
熱導 |
* 在執行等溫化學變性實驗時
熱分析儀的應用範圍遍及各種產業,其中包括:
生物製藥、生物高分子與聚合物結構穩定性分析的「黃金標準」
示差掃描量熱法 (DSC) 是一種微量熱計量技術,可用來分析蛋白或其他生物分子的結構穩定性。其運作方式為測量與分子以固定速度加熱時與熱變性相關的熱變化。
理論上,熱轉變中點 (Tm) 愈高,分子愈穩定。DSC 測量熱引發變性所導致之展開的焓(∆H)。它也可以用來判定變性的熱容變化 (ΔCp)。DSC 可以釐清促成生物分子之摺疊與穩定性的各項因素。這些因素包括斥水性交互作用、氫鍵結、構形熵和物理環境。
測量結合親和力和化學計量的「黃金標準」
等溫滴定量熱法 (ITC) 是一種免標記量化技術,可用來研究生物分子間的交互作用。其運作方式為測量結合過程中釋放 (放熱反應) 或吸收 (吸熱反應) 的熱能。
ITC 是唯一能在單次實驗中同時測定所有結合參數的技術,不需要使用螢光標記或透過固定化來修飾結合配對物種,便能測量結合配對物種在其原始狀態下的親和力。
藉由測量結合過程中的熱傳遞,可精準測定結合常數 (KD)、反應化學計量 (n)、焓 (∆H) 和熵 (ΔS)。這可針對分子間交互作用提供完整的熱力學概貌,
示差掃描螢光法 (DSF) 是一種螢光光譜技術,可監測蛋白質相對於施加溫度的固有放射光譜。在熱變性過程中,構成蛋白質的氨基酸暴露於更親水的環境,導致固有螢光氨基酸 (Trp、Tyr) 的最大訊號 (λmax) 從 330 nm 變成 350 nm。接著,這種易於觀察的訊號可對照溫度繪成圖表,並將二階導數應用於資料,即可求出熱轉化溫度 (Tm)。
結合親和力單一蛋白質可能經常發生多種熱轉化,因此這項技術非常適合用於監測多種應用,例如突變對蛋白質結構穩定性的影響,以及緩衝液組成對蛋白質穩定性的影響。此技術甚至可用於研究低分子量配體的結合親和力,依此排序潛在候選藥物的
MicroCal DSC 系列生物製藥、生物高分子與聚合物結構穩定性分析的「黃金標準」 |
MicroCal ITC 系列測量結合親和力和化學計量的「黃金標準」 |
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技術類型 | ||
差示扫描量热法 (DSC) | ||
等温滴定量热法 (ITC) | ||
微量熱分析法 | ||
量測類型 | ||
免標定分析 | ||
蛋白質穩定性 |