ワクチン開発に焦点を当てる3 – rAAVウイルスベクター開発の分析ワークフローの強化

組み換えアデノ関連ウイルス(rAAV)は、遺伝子治療の開発で集中的に調査されているウイルスベクターの、十分に研究されたクラスです。制御された経済的な製造プロセスを通じて製造された効率的なrAAV療法を開発するために、複数の課題に取り組む必要があります。

rAAVは通常、大型バイオリアクターの組み換え細胞株で製造されます。細胞内で生成されると、rAAV粒子は溶解によって放出され、密度勾配遠心分離、イオン交換クロマトグラフィー、接線流ろ過などの複数回の分離で、バルクハーベストから分離されます。

下流精製プロセスでは、複数のアッセイが実行して、収量、有効性、安全性を決定するための主要な分析属性を決定し、プロセスの理解と制御を可能にします。これらのパラメータは、通常、カプシドまたは粒子数、ゲノムカウント、%ゲノム含有または%フルrAAV粒子、血清型特性評価、粒子径、凝集レベル、および不要な宿主細胞タンパク質やヌクレオチドの存在に限定されません。

最初の3つのパラメータ(カプシド／粒子径、ゲノム数、%完全)は、通常、qPCR、ELISA、AUC、HPLC-AEX、およびTEMのうち2つ以上のアッセイを使用して測定されます。各メソッドには、測定されたパラメータ、必要なスループット、精度、サンプル量の要件に関連する固有の強度と脆弱性があります。

マルチアングル動的高散乱(MADLS)は、凝集、カプシド電荷、粒子濃度など、複数のrAAVパラメータを同時に測定できる新しい手法です。既存の分析ワークフローで使用できる補完的なアッセイとして最適で、総rAAV粒子濃度を迅速で、ラベルのない非破壊的に小容量を測定できます。

このウェビナーでは、Malvern PanalyticalのJonathan Mehtala氏が、MADLS測定の原理と、この新しい手法をrAAVモデルサンプルの特性評価に適用する方法、および開発中のrAAV治療法について説明します。rAAV粒子のウイルス濃度とサイズに関する結果データについて、試料の屈折率や粘度などのサンプル特性の影響についても説明します。つづいて、AllerganのKirsty McManus氏が、製剤原料とプロセス開発サンプルの複数血清型rAAV分析のケーススタディの実例を紹介します。

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