In diesem technischen Hinweis zeigen wir, wie das Creoptix WAVE zur genauen Messung der schnellen Off-Raten-Kinetik schwach bindender Moleküle genutzt werden kann. Dank des Kartuschendesigns, das ultraschnelle Übergangszeiten von 150 ms ermöglicht, können jetzt auch bei geringer Wirkstärke Treffer gefunden werden, was eine erfolgreichere Arzneimittelforschung ermöglicht.
Schwache Bindemittel, wie sie in fragmentbasierten Screening-Bibliotheken zu finden sind, werden in der Regel nach Affinität und nicht nach Kinetik geordnet. Dies liegt daran, dass mit der Standardinstrumentierung keine schnellen Off-Raten gemessen werden können. Die Messung von Affinität statt von Off-Raten kann jedoch zu einer großen Anzahl falsch-positiver Ergebnisse führen, was die Arbeitsabläufe verkompliziert und unnötige Kosten verursacht.
Das Creoptix WAVE verwendet eine proprietäre Gitter-gekoppelte Interferometrie (GCI)-Technologie und ermöglicht die Bestimmung von schnellen Off-Raten von bis zu 10 s-1. Dies ermöglicht eine genaue, frühzeitige Phasenauswahl echter Treffer, was die Effizienz erheblich steigert.
Durch die Messung der Bindungskinetik von Methylsulfonamid an Carboanhydrase II zeigen wir, dass das Creoptix WAVEsystem selbst bei großen Ziel-zu-Analyt-Molekulargewichtsverhältnissen eine hervorragende Auflösung bei extrem schnellen Off-Raten bietet.
| Kinetische Daten | |||
|---|---|---|---|
| Creoptix WAVE | Biacore™ S51 | ||
| kon (M-1 s-1) | 9,36 x 103 | kon (M-1 s-1)
|
8,05 x 103 |
| koff (s-1) | 2.86 | koff (s-1)
|
2.21 |
| KD (uM) | 306 | KD (uM) | 274 |
Tabelle 1: Kinetische Daten im Vergleich mit veröffentlichten Daten in Myszka, David G. „Analysis of small-molecule interactions using Biacore S51 technology“. (Analyse kleinmolekularer Wechselwirkungen mit der Biacore S51-Technologie). Analytical biochemistry 329.2 (2004): 316-323.
Legende: (A) Sensorgramm von Methylsulfonamid (95,1 Da), gebunden an Carboanhydrase II (29 kDa), immobilisiert durch Aminkopplung auf einem WAVEchip PCH bei 8500 pg/mm2 an Durchflusszelle 1. Die Daten wurden bei 40 Hz mit einer Durchflussrate von 200 μl/min erfasst. (B) Vergrößerung der Assoziationsphase (links) und der Dissoziationsphase (rechts) mit den entsprechenden Restverteilungsdiagrammen unten, die die hohe und klare Kinetikauflösung zeigen.
![[Abbildung 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg] Abbildung 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg](https://p3.aprimocdn.net/malvernpanalytical/8ddb9b09-3dfd-400a-91e2-ae360106df9b/Figure%201%20TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives_Original%20file.jpg)
Abbildung 1: Methylsulfonamid (95,1 Da), gebunden an Carboanhydrase II (CAII) 1 pg/mm2 = 1 RU
