Lentivirale Vektoren

Der Zetasizer Advance Ultra nutzt die Technologien der dynamischen Lichtstreuung (DLS) und der dynamischen Mehrwinkel-Lichtstreuung (MADLS). Die wichtigsten Funktionen für die Charakterisierung vor lentiviraler Vektoren sind:

• Größenmessungen: DLS misst die Größe von Lentivirus-Partikeln auf Grundlage der Lichtstreuung, wenn die Partikel eine Brownsche Bewegung ausführen. Das Verfahren ermöglicht eine schnelle und genaue Beurteilung der durchschnittlichen Partikelgröße und der Polydispersität.
• Virustiter: MADLS verbessert die Genauigkeit von Größenmessungen und ermöglicht die Bestimmung der Partikelkonzentration, was zu präzisen Berechnungen der lentiviralen Titration beiträgt.
• Zeta-Potenzial: Der Zetasizer Advance Ultra bewertet das Zeta-Potenzial viraler Vektoren und gibt deren Oberflächenladung und Stabilität in Suspension an – das ist unerlässlich für die Vorhersage der Haltbarkeit und des Verhaltens in vivo.
• Hohe Empfindlichkeit: Der Zetasizer Advance Ultra kann eine Vielzahl von Partikelgrößen mit hoher Genauigkeit erkennen und ist somit für verschiedene Phasen der Lentivirus-Herstellung und -Entwicklung geeignet.

Der Zetasizer Advance Ultra liefert detaillierte Informationen zu Partikelgröße und Stabilität und hilft bei der Optimierung lentiviraler Vektorformulierungen, um eine konsistente Leistung zu gewährleisten und die Formulierungsstabilität genau vorherzusagen.

Der NanoSight Pro verwendet die Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) und fortschrittliche Software, um Nanopartikel in flüssiger Suspension zu charakterisieren. Zu den Hauptfunktionen bei der Charakterisierung lentiviraler Vektoren gehören:

• Größenmessungen: Durch die Verfolgung der Brownschen Bewegung einzelner Partikel ermittelt der NanoSight Pro exakt die Größenverteilung von Lentiviren. Diese detaillierte Größenanalyse spielt in Verbindung mit der direkten visuellen Bestätigung eine entscheidende Rolle bei der Optimierung der Entwicklung von Lentivirus-Formulierungen und bietet wertvolle Einblicke in Probenstabilität und -reinheit.
• Konzentrationsmessungen (Titration): Der NanoSight Pro bietet eine präzise Zählung der Viruspartikel, sodass Forschende die Lentiviruskonzentration direkt berechnen können. Dies gewährleistet robuste Produktionsprozesse und eine konsistente Dosierung sowohl in der Forschung als auch bei therapeutischen Anwendungen.
• Aggregationserkennung: Der NanoSight Pro kann Aggregate lentiviraler Partikel visualisieren, identifizieren und quantifizieren. Die Aggregation kann die Transduktionseffizienz beeinträchtigen und Immunreaktionen auslösen, was für die Qualitätskontrolle bei der Herstellung von Lentiviren unerlässlich ist.
• Fluoreszenzfähigkeit: Durch die Fluoreszenzdetektion kann das Gerät zwischen markierten und nicht markierten Partikeln unterscheiden, wodurch die Spezifität bei komplexen Proben erhöht wird. Dies ist entscheidend für das Verständnis der Interaktion von lentiviralen Vektoren mit biologischen Systemen.

Der NanoSight Pro bietet Echtzeit-Visualisierung und hochauflösende Analysen und ermöglicht Forschenden ein umfassendes Verständnis ihrer Lentivirus-Vektorproben.

Die Kombination der Funktionen des NanoSight Pro und Zetasizer Advance Ultra ermöglicht einen umfassenderen Ansatz bei der Charakterisierung lentiviraler Vektoren:

Funktion	NanoSight Pro	Zetasizer Advance Ultra
Messungen	Partikelgröße, Virustiter und Polydispersität	Partikelgröße, Virustiter, Polydispersität und Zeta-Potenzial
Technologie	Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA)	Dynamische Lichtstreuung (DLS) und Mehrwinkel-DLS (MADLS)
Größenbereich	30–1000 nm	­<1 nm bis 10 μm
Konzentrationsbereich	Von 107 bis 109 Partikel/ml	Von 108 bis 1013 Partikel/ml
Größenmessungen	Liefert eine hochauflösende Partikelgrößenverteilung	Schnelle und präzise Messung des hydrodynamischen Durchmessers
Polydispersität	Hervorragende Ergebnisse bei polydispersen Proben und sofortige visuelle Bestätigung	Am besten geeignet für monodisperse oder leicht polydisperse Proben
Zeta-Potenzial	Nicht verfügbar	Messung des Zeta-Potenzials für die Beurteilung der Oberflächenladung und Stabilität
Fluoreszenzfähigkeit	Verfügbar zur Unterscheidung markierter Partikel mit spezifischen Eigenschaften	Nicht verfügbar
Visualisierung	Echtzeit-Visualisierung von Partikeln und Verhalten	Nicht verfügbar
Datenausgabe	Zahlenbasierte Größenverteilungen	Intensitätsgewichtete Größenverteilungen
Probenvorbereitung	Minimale Probenvorbereitung gewährleistet Integrität	Zerstörungsfreie, minimale Probenvorbereitung erforderlich
Ideale Anwendungen	Detaillierte Analyse polydisperser und verdünnter Proben	Schnelle Charakterisierung kleiner, monodisperser Nanopartikel

In einigen Fällen kann der NanoSight Pro besser geeignet sein, wenn eine detaillierte Partikelcharakterisierung erforderlich ist, z. B. während der frühen Phase der Entwicklung lentiviraler Vektorformulierungen, bei der Untersuchung von Aggregationsproblemen oder bei der Verwendung von Fluoreszenz, um eine bestimmte Proben-Subpopulation zu untersuchen. Der Zetasizer Advance Ultra wird bevorzugt für routinemäßige Qualitätskontrollen, Stabilitätsstudien und wenn Zeta-Potenzialdaten benötigt werden, eingesetzt. 

Durch die Nutzung der Stärken beider Instrumente können Forschende ein tiefergehendes Verständnis für lentivirale Vektoren erlangen, was zu einer verbesserten Wirksamkeit und Sicherheit bei Gentherapien führt.