PEAQ-ITC

Medição de alta sensibilidade de todos os parâmetros de ligação

O PEAQ-ITC, uma tecnologia MicroCal, é um calorímetro de titulação isotérmica de baixo volume e altamente sensível para o estudo de interações biomoleculares em solução, sem rótulo. Ele fornece medição direta de todos os parâmetros de ligação em um único experimento e pode analisar ligantes de baixa a alta afinidade, usando apenas uma amostra de 10 µg. A manutenção semiautomatizada minimiza a intervenção do operador, e o sistema pode ser atualizado para o PEAQ-ITC Automated totalmente automatizado, o que o torna ideal para laboratórios nos quais a velocidade, a sensibilidade e a capacidade de acomodar cargas de trabalho maiores no futuro são fundamentais.

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Visão geral

O MicroCal PEAQ-ITC foi projetado para proporcionar facilidade de uso e sensibilidade excepcional. O sistema mede diretamente o calor liberado ou absorvido durante os eventos de ligação bioquímica, a partir dos quais ele mede a afinidade de ligação (KD), a estequiometria (n), a entalpia (ΔH) e a entropia (ΔS). Com otimização do sistema e preparação de amostras mínimas, são gerados dados de maneira rápida e fácil. Sua ampla gama de afinidade permite a análise de ligantes de baixa a alta afinidade, com excelente capacidade de reprodução. O MicroCal ITC é uma ferramenta essencial para qualquer laboratório de pesquisa de interações biomoleculares onde a alta sensibilidade e a rapidez de resultados sejam primordiais.

  • Os fluxos de trabalho guiados e fáceis de usar, com vídeos de ajuda integrados, possibilitam a geração de dados de alta qualidade, não importa o nível do usuário.
  • A alta sinalização ao barulho proporciona confiança no acesso à qualidade dos dados, além de relevância da afinidade gerada e dos parâmetros termodinâmicos.
  • A lavagem automatizada da célula de amostra, com detergente, e a seringa de titulação auxiliam na produção de dados reproduzíveis de alta qualidade.
  • Todos os parâmetros de ligação (afinidade, estequiometria, entalpia e entropia) em um único experimento.
  • Rápido até os primeiros resultados, sem desenvolvimento de análise, sem identificação, nenhuma imobilização e nenhum limite de peso molecular.
  • Sensibilidade para investigar qualquer interação biomolecular usando apenas 10 µg de proteína.
  • Mede diretamente as afinidades de milimolares a nanomolares (de KDS) (10-2 a 10-9 M).
  • Mede as constantes de dissociação nanomolares a picomolares usando técnicas de ligação competitivas (de 10-9 a 10-12M).
  • Hastelloy não reativo para resistência química e compatibilidade com amostras biológicas.
  • Compatível com solventes não aquosos.
  • Atualizável para o MicroCal PEAQ-ITC Automated totalmente automatizado.

Uma ampla gama de aplicações pode ser investigada com o MicroCal PEAQ-ITC, incluindo a caracterização de interações moleculares de pequenas moléculas, proteínas, anticorpos, ácidos nucleicos, lipídeos e outras biomoléculas. Também pode ser usado para medir a cinética de enzimas. 

Software de análise

O software MicroCal PEAQ-ITC Analysis oferece simulação de design de experimentos, avaliação em lote de grandes conjuntos de dados, avaliação automatizada da qualidade dos dados, além de interface de usuário simplificada para guiar o usuário até os valores finais e os gráficos de qualidade de apresentação, com rapidez e facilidade.

  • Abra vários experimentos em uma única sessão.
  • Compatível com muitos modelos de encaixe automatizado.
    • Dissociação.
    • Cinética enzimática - várias injeções.
    • Cinética enzimática - injeção única.
    • Um conjunto de locais de ligação.
    • Locais de ligação sequenciais.
    • Um conjunto de locais - SIM.
    • Dois conjuntos de locais de ligação.
    • Competitivo.
  • Avaliação automatizada da qualidade dos dados.
    • Boa qualidade de dados - com ligação.
    • Boa qualidade de dados - sem ligação.
    • Baixa qualidade dos dados - verificar dados

Como funciona

Os microcalorímetros de titulação isotérmica medem a mudança de calor que ocorre quando duas moléculas interagem. O calor é liberado ou absorvido como resultado da redistribuição e formação de ligações não covalentes quando as moléculas que estão interagindo vão do estado livre para o estado ligado. A ITC monitora essas mudanças de calor medindo a potência diferencial, aplicada aos aquecedores de célula, exigidos para manter a diferença de temperatura em zero entre as células de referência e as de amostra uma vez que os parceiros de ligação estão misturados. A célula de referência normalmente contém água, enquanto a célula de amostra contém um dos parceiros de ligação (a amostra, que, frequentemente, embora nem sempre, é uma macromolécula) e uma seringa de agitação que contém o outro parceiro de ligação (o ligando). O ligando é injetado na célula de amostra, tipicamente em porções de 0,5 a 2 μL, até que a concentração do ligando seja de duas a três vezes maior do que a amostra. Cada injeção de ligante resulta em um pulso de calor que é integrado com relação ao tempo e normalizado para concentração para gerar uma curva de titulação de kcal/mol vs proporção molar (ligante/amostra). A curva isotérmica resultante é ajustada a um modelo de ligação para gerar a afinidade (KD), a estequiometria (n) e a entalpia de interação (ΔH).

MicroCal PEAQ ITC Microcalorimeters for microcalorimetry and label free analysis using isothermal titration calorimetry

MicroCal PEAQ ITC Microcalorimeters for microcalorimetry and label free analysis using isothermal titration calorimetry

Especificação

Tipo de medição Afinidade (KD)
Entalpia ∆H
Entropia ∆S
Estequiometria (n)
Volume da amostra 280 µL
Volume da célula 200 µL
Volume da seringa de injeção 40 µL
Precisão de volume de injeção < 1% @ 2 µL
processamento de amostra 0-12 a cada 8h/dia
Material da célula Hastelloy
Célula Em formato de moeda
Ruído 0,15 ncal/s
Faixa de temperatura 2 °C a 80 °C
Estabilidade da temperatura ± 0.00012°C
Tempo de resposta 8 s*
Modos de feedback múltiplos Sim (passivo, ganho alto, ganho baixo)
Observações *O tempo de resposta do instrumento MicroCal PEAQ-ITC é uma constante de tempo real.  É o intervalo de tempo entre o primeiro desvio da linha de base e o ponto no pico que seja 63% da altura máxima do pico.

Ambiente operacional

Temperatura operacional (°C) 10 °C a 28 °C
Umidade 0% a 70% RH, sem condensação

Intervalos elétricos

Potência 100 - 200 V, 50/60 Hz, 130 W
Peso 13,6 kg
Dimensões (L, P, A) 43 x 38 x 46 cm (calorímetro + estação de lavagem)

Principais Aplicações

Os instrumentos MicroCal PEAQ-ITC oferecem grande valor para uma ampla variedade de aplicações, algumas das quais estão destacadas abaixo.

Determinação de Afinidade em Sistemas Biológicos

O ITC é ideal para medir afinidades e estequiometrias de interações biológicas com alta precisão. Ele não exige marcação ou imobilização das moléculas interagentes e não possui limitações de massa molecular. Milhares de estudos utilizaram ITC para investigar interações biológicas envolvendo proteínas, ácidos nucleicos, anticorpos, carboidratos, lipídios, ATP, inibidores e compostos farmacêuticos, entre outros.

Mecanismo de Ação

Onde o ligante se liga ao alvo? No sítio ativo? No sítio alostérico? A interação é competitiva, não competitiva ou incompetitiva em relação a outros ligantes e cofatores? A ligação é cooperativa?

O ITC fornece insights valiosos sobre esses mecanismos de ligação e interação.

Cinética Enzimática

Você possui um ensaio simples para sua enzima? Seu ensaio envolve um procedimento complexo? Modificar seu substrato interfere nos estudos de SAR ou mecanismo de ação?

O ITC pode ser usado para estudar qualquer reação enzimática, requer apenas quantidades mínimas de material (na faixa de nano a picogramas) e é livre de marcação.

Concentração Micelar Crítica (CMC)

O ITC tem sido amplamente utilizado para a determinação da CMC em uma grande variedade de complexos micelares, incluindo surfactantes, copolímeros em bloco, peptídeos e proteínas anfifílicas, bem como surfactantes derivados de aminoácidos e lipídios funcionalizados com grupos amino.

Manuais do usuário

Downloads de software

05 November 2021

1.41

Analysis Software

  •     Maintenance release
1.41

05 November 2021

1.41

Control Software

  •     Maintenance release
1.41

12 January 2021

1.40

Analysis Software

  •     Maintenance release
1.40

12 January 2021

1.40

Control Software

  •     Maintenance release
1.40

23 April 2020

1.30

Control Software

  •     Maintenance release
1.30

23 April 2020

1.30

Analysis Software

  •     Maintenance release
1.30

20 March 2019

1.22

Control software
  • Maintenance release
1.22

20 March 2019

1.22

Analysis software
  • Maintenance release
1.22

03 September 2018

1.21

Control software
  • Windows 10 compatibility
  • Maintenance release
  • Licensing requirement
  • Adaptive Filter Disabling
1.21

03 September 2018

1.21

Analysis software
  • Windows 10 compatibility
  • Maintenance release
  • Licensing requirement
  • Adaptive Filter Disabling
1.21

17 April 2015

1.0

MicroCal ITC Origin Analysis software Dissociation model update
1.0

21 February 2018

1.0

MicroCal Concat ITC software
  • Initial release
1.0

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Atendimento Prioritário
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O "Padrão Ouro" para medir afinidade de ligação e estequiometria

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