Visão geral
O MicroCal PEAQ-ITC foi projetado para proporcionar facilidade de uso e sensibilidade excepcional. O sistema mede diretamente o calor liberado ou absorvido durante os eventos de ligação bioquímica, a partir dos quais ele mede a afinidade de ligação (KD), a estequiometria (n), a entalpia (ΔH) e a entropia (ΔS). Com otimização do sistema e preparação de amostras mínimas, são gerados dados de maneira rápida e fácil. Sua ampla gama de afinidade permite a análise de ligantes de baixa a alta afinidade, com excelente capacidade de reprodução. O MicroCal ITC é uma ferramenta essencial para qualquer laboratório de pesquisa de interações biomoleculares onde a alta sensibilidade e a rapidez de resultados sejam primordiais.
- Os fluxos de trabalho guiados e fáceis de usar, com vídeos de ajuda integrados, possibilitam a geração de dados de alta qualidade, não importa o nível do usuário.
- A alta sinalização ao barulho proporciona confiança no acesso à qualidade dos dados, além de relevância da afinidade gerada e dos parâmetros termodinâmicos.
- A lavagem automatizada da célula de amostra, com detergente, e a seringa de titulação auxiliam na produção de dados reproduzíveis de alta qualidade.
- Todos os parâmetros de ligação (afinidade, estequiometria, entalpia e entropia) em um único experimento.
- Rápido até os primeiros resultados, sem desenvolvimento de análise, sem identificação, nenhuma imobilização e nenhum limite de peso molecular.
- Sensibilidade para investigar qualquer interação biomolecular usando apenas 10 µg de proteína.
- Mede diretamente as afinidades de milimolares a nanomolares (de KDS) (10-2 a 10-9 M).
- Mede as constantes de dissociação nanomolares a picomolares usando técnicas de ligação competitivas (de 10-9 a 10-12M).
- Hastelloy não reativo para resistência química e compatibilidade com amostras biológicas.
- Compatível com solventes não aquosos.
- Atualizável para o MicroCal PEAQ-ITC Automated totalmente automatizado.
Uma ampla gama de aplicações pode ser investigada com o MicroCal PEAQ-ITC, incluindo a caracterização de interações moleculares de pequenas moléculas, proteínas, anticorpos, ácidos nucleicos, lipídeos e outras biomoléculas. Também pode ser usado para medir a cinética de enzimas.
Software de análise
O software MicroCal PEAQ-ITC Analysis oferece simulação de design de experimentos, avaliação em lote de grandes conjuntos de dados, avaliação automatizada da qualidade dos dados, além de interface de usuário simplificada para guiar o usuário até os valores finais e os gráficos de qualidade de apresentação, com rapidez e facilidade.
- Abra vários experimentos em uma única sessão.
- Compatível com muitos modelos de encaixe automatizado.
- Dissociação.
- Cinética enzimática - várias injeções.
- Cinética enzimática - injeção única.
- Um conjunto de locais de ligação.
- Locais de ligação sequenciais.
- Um conjunto de locais - SIM.
- Dois conjuntos de locais de ligação.
- Competitivo.
- Avaliação automatizada da qualidade dos dados.
- Boa qualidade de dados - com ligação.
- Boa qualidade de dados - sem ligação.
- Baixa qualidade dos dados - verificar dados
Como funciona
Os microcalorímetros de titulação isotérmica medem a mudança de calor que ocorre quando duas moléculas interagem. O calor é liberado ou absorvido como resultado da redistribuição e formação de ligações não covalentes quando as moléculas que estão interagindo vão do estado livre para o estado ligado. A ITC monitora essas mudanças de calor medindo a potência diferencial, aplicada aos aquecedores de célula, exigidos para manter a diferença de temperatura em zero entre as células de referência e as de amostra uma vez que os parceiros de ligação estão misturados. A célula de referência normalmente contém água, enquanto a célula de amostra contém um dos parceiros de ligação (a amostra, que, frequentemente, embora nem sempre, é uma macromolécula) e uma seringa de agitação que contém o outro parceiro de ligação (o ligando). O ligando é injetado na célula de amostra, tipicamente em porções de 0,5 a 2 μL, até que a concentração do ligando seja de duas a três vezes maior do que a amostra. Cada injeção de ligante resulta em um pulso de calor que é integrado com relação ao tempo e normalizado para concentração para gerar uma curva de titulação de kcal/mol vs proporção molar (ligante/amostra). A curva isotérmica resultante é ajustada a um modelo de ligação para gerar a afinidade (KD), a estequiometria (n) e a entalpia de interação (ΔH).