질량 이송 제한 없이 낮은 고정화 수준에서 고감도 분석

요약

분자 상호작용에 대한 무표지 분석에서 질량 이송 제한은 1차 동역학과의 중요한 편차원입니다. 벌크 용액과 표면 사이의 분석물 농도 구배에서 발생하는 질량 이송 제한은 측정 가능한 결합 신호를 생성하는 데 자주 필요한 고밀도 리간드 고정화 수준에서 특히 두드러집니다.

독점 도파관 간섭법(GCI) 기술을 사용하는 Creoptix WAVE는 기존의 표면 플라즈마 공명(SPR) 방법론에 비해 뛰어난 감도를 제공하며, 특히 활성 상태가 불량한 단백질의 낮은 리간드 고정화 수준에서 더욱 뛰어난 감도를 제공합니다. 이는 매우 높은 응답(R_max < 1)에서도 신뢰할 수 있는 동역학을 의미합니다.

여기서는 아세타졸라미드와 카보닉 안히드라제 II 사이의 상호작용을 특성 분석함으로써 Creoptix WAVE가 다양한 효소 고정화 밀도를 사용하여 질량 이송 제한을 회피하면서도 샘플 소비를 크게 줄일 수 있음을 보여줍니다.

표 1: 다양한 카보닉 안히드라제 II(CAII) 밀도에 결합하는 아세타졸아미드의 동역학 데이터

범례: (A) 저 및 고 고정화 밀도에서 아세타졸라미드(분석물, MW 222.25 Da)와 카보닉 안히드라제 II(CAII, 리간드, MW 29kDa) 간의 상호작용을 보여주는 센서그램. CAII는 표시된 대로 서로 다른 고정화 밀도로 4PCH WAVEchip에서 포획되었습니다. 각 고정화 수준에서 아세타졸라미드의 선량 반응 곡선이 기록되었습니다. 상호작용이 Creoptix WAVEcontrol 소프트웨어를 사용하는 1:1 모델(오른쪽)에서 벗어났기 때문에 고 고정화 수준(왼쪽)의 데이터를 피팅하기 위해 질량 이송 제한(MTL) 모델이 사용되었습니다. (B) 데이터는 저 고정화 수준에서 동역학 피팅이 질량 이송 제한이 아니라 1차 동역학을 따르고 있음을 보여줍니다.

그림 1: 다양한 카보닉 안히드라제 II(CAII) 밀도에 결합하는 아세타졸아미드