Cromatografia líquida

Como há muitas combinações de fase móvel/fixa que podem ser empregadas ao separar uma mistura, há vários tipos diferentes de cromatografia classificados com base nos estados físicos dessas fases. A cromatografia de coluna líquida-sólida, a técnica de cromatografia mais popular, possui uma fase móvel líquida que filtra lentamente por meio da fase fixa sólida, trazendo os componentes separados com ela.

Se baseia nas bombas para passar um solvente líquido pressurizado que contém a mistura de amostra por meio de uma coluna preenchida com um material absorvente sólido. Cada componente da amostra interage de forma ligeiramente diferente com o material adsorvente, causando diferentes taxas de transporte para os diferentes componentes e levando à separação dos componentes à medida que eles fluem para fora da coluna.

Existem muitos tipos diferentes de técnicas e sistemas de cromatografia disponíveis para uma ampla gama de aplicações, todos definidos como Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).

A análise de HPLC concentra-se no isolamento de macromoléculas através da interação química, afinidade ou volume hidrodinâmico. A SEC-HPLC trabalha por interação física com os meios porosos das colunas de cromatografia, esta é uma diferença notável entre a SEC e muitas outras técnicas de cromatografia líquida. A interação química da amostra com a coluna não é necessária ou desejada, pois a separação deve ser baseada apenas no tamanho molecular (pelo raio de Stokes de uma partícula). A SEC é usada principalmente para a análise de moléculas grandes, como proteínas, polímeros e polissacarídeos.
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Nas colunas da SEC, as moléculas menores na amostra poderão entrar nos poros do meio poroso, residir por mais tempo ou entrar nos poros com mais frequência. Por outro lado, as moléculas maiores na amostra têm mais restrições quanto ao tamanho dos poros que podem entrar, entrar com menos frequência ou apenas por passar pelos poros, caso sejam muito grandes para entrar nos poros. 

Portanto, as moléculas maiores seguirão por meio da coluna mais rapidamente do que as moléculas menores, ou seja, quanto menor a molécula, maior será o tempo de retenção. No SEC/GPC, lembre-se de que os grandes vêm primeiro. 

A Malvern Panalytical oferece uma gama de sistemas e detectores avançados para cromatografia de exclusão de tamanho (SEC), também conhecida como cromatografia de permeação de gel (GPC) ou cromatografia de filtração de gel, para a medição de peso molecular absoluto, tamanho molecular, viscosidade intrínseca, ramificação e outros parâmetros físicos.