En esta nota técnica, mostramos la notable sensibilidad de Creoptix WAVE. Gracias al campo de detección ampliado sobre el que la tecnología de interferometría acoplada a la rejilla (GCI, del inglés Grating-Coupled Interferometry) realiza mediciones, es posible determinar cinética de alta resolución incluso con respuestas muy bajas, lo que puede reducir significativamente los costos de material.
Durante el análisis sin etiquetas de interacciones moleculares, la limitación del transporte de masa representa una fuente significativa de desviación de la cinética de primer orden. Debido a los gradientes de concentración de analitos entre la solución volumétrica y la superficie, la limitación del transporte de masa es especialmente pronunciada en los niveles de inmovilización del ligando de alta densidad que a menudo se requieren para generar una señal de unión medible.
Mediante una tecnología patentada de interferometría acoplada en rejilla (GCI), Creoptix WAVE ofrece una sensibilidad superior a las metodologías tradicionales de resonancia plasmática superficial (SPR), especialmente con bajos niveles de inmovilización de ligando de proteínas poco activas. Esto se traduce en una cinética confiable incluso con respuestas muy (Rmáx <1).
Mediante la caracterización de la interacción entre la acetazolamida y la anhidrasa carbónica II, utilizando diferentes densidades de inmovilización de la enzima, mostramos que Creoptix WAVE permite un consumo de muestra muy reducido, a la vez que evita la limitación del transporte de masa.
| Nivel de captura DE CAII
(pg/mm2) |
kon (M-1.s-1) |
koff (s-1) |
km | Rmáx (pg/mm2) |
KD (nm) |
|
|---|---|---|---|---|---|---|
| Modelo de datos cinéticos MTL | 8100 | 1,29 x 106 | 0,0418 | 6,12 x 106 | 18,688 | 32,5 |
| Modelo cinético de datos en 1:1 | 1240 | 0,77 x 106 | 0,0324 | - | 0,469 | 42,3 |
Tabla 1: Datos cinéticos de la unión de acetazolamida a diferentes densidades de anhidrasa carbónica II (CAII)
Leyenda: (A) Sensogramas que muestran la interacción entre acetazolamida (analito, MW 222,25 Da) y anhidrasa carbónica II (CAII, ligando, MW 29 kDa) a densidades de inmovilización bajas y altas. CAII fue capturada en un WAVEchip 4PCH a diferentes densidades de inmovilización, como se indicó. Se registraron curvas dosis-respuesta para acetazolamida en cada nivel de inmovilización. Se utilizó el modelo de limitación de transporte de masa (MTL) para ajustar los datos del alto nivel de inmovilización (izquierda), ya que la interacción se desvió del modelo 1:1 (derecha) mediante el software Creoptix WAVEcontrol. (B) Los datos muestran que los ajustes cinéticos en el nivel bajo de inmovilización no son limitados en el transporte de masa, sino que siguen una cinética de primer orden.
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Figura 1: La unión de acetazolamida a diferentes densidades de anhidrasa carbónica II (CAII)
