En esta nota técnica mostramos cómo Creoptix WAVE puede ser usada para medir con precisión la cinética rápida de la tasa de disociación de moléculas de unión débil. Gracias al diseño del cartucho que permite tiempos de transición ultrarrápidos de 150 ms, ahora se pueden detectar fácilmente hits de baja potencia para un descubrimiento de fármacos más exitoso.
Los aglutinantes débiles, como los que se encuentran en las bibliotecas de cribado basadas en fragmentos, suelen clasificarse por afinidad en lugar de por cinética. Esto se debe a que la instrumentación estándar carece de la capacidad para medir las tasas de disociación rápidas. Sin embargo, la medición de la afinidad en lugar de las tasas de disociación puede generar un gran número de resultados falsos positivos, lo que amplía los flujos de trabajo y conlleva costos innecesarios.
Empleando una tecnología patentada de interferometría acoplada en rejilla (GCI), Creoptix WAVE proporciona resolución de tasas de disociación rápidas de hasta 10s-1. Esto permite una selección precisa y temprana de los hits reales para aumentar considerablemente la eficiencia.
Mediante la medición de la cinética de unión de la sulfonamida de metilo a la anhidrasa carbónica II, demostramos que el sistema Creoptix WAVEsystem logra una resolución extraordinaria a tasas de disociación extremadamente rápidas, incluso para grandes proporciones de peso molecular objetivo-analito.
| Datos cinéticos | |||
|---|---|---|---|
| Creoptix WAVE | Biacore™ S51 | ||
| kon (M-1 s-1) | 9,36 x 103 | kon (M-1 s-1)
|
8,05 x 103 |
| koff (s-1) | 2.86 | koff (s-1)
|
2.21 |
| KD (uM) | 306 | KD (uM) | 274 |
Tabla 1: Datos cinéticos comparados con datos publicados en Myszka, David G. “Análisis de interacciones de moléculas pequeñas mediante la tecnología Biacore S51”. Bioquímica analítica 329.2 (2004): 316-323.
Leyenda: (A) Sensograma de metilsulfonamida (95,1 Da) que se une a la anhidrasa carbónica II (29 kDa) inmovilizado mediante acoplamiento de amina en un WAVEchip PCH a 8500 pg/mm2 en la celda de flujo 1. Los datos se obtuvieron a 40 Hz con una velocidad de flujo de 200 μl/min. (B) Ampliar la fase de asociación (izquierda) y la fase de disociación (derecha) con los respectivos gráficos de distribución residual que se muestran a continuación, mostrando la resolución alta y clara de la cinética.
![[Figura 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg] Figura 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg](https://p3.aprimocdn.net/malvernpanalytical/8ddb9b09-3dfd-400a-91e2-ae360106df9b/Figure%201%20TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives_Original%20file.jpg)
Figura 1: Metilsulfonamida (95,1 Da) que se une a la anhidrasa carbónica II (CAII). 1 pg/mm2 = 1 RU
