En esta nota técnica se muestra cómo Creoptix WAVE puede utilizarse para monitorizar con precisión la cinética de unión de grandes relaciones de peso molecular objetivo-analito (MW) (>300:1), gracias al campo de detección ampliado sobre el que la tecnología de interferometría acoplada en rejilla mide la alta sensibilidad.
El análisis en tiempo real y sin etiquetas de las interacciones entre moléculas pequeñas y dianas de fármacos proporciona información valiosa para guiar el proceso de descubrimiento de fármacos e identificar candidatos de fármacos prometedores. Sin embargo, los aglutinantes débiles y las grandes relaciones de peso molecular (PM) objetivo-analito pueden hacer que la caracterización cinética sea extremadamente difícil, ya que a menudo requieren una alta sensibilidad y la capacidad de medir con confianza las frecuencias bajas rápidas (koff).
Con una tecnología patentada de interferometría acoplada a la rejilla (GCI, del inglés Grating-Coupled Interferometry), Creoptix® WAVE proporciona la mejor sensibilidad de su clase para permitir la generación de datos cinéticos de gran exactitud incluso a niveles de señal bajos. En combinación con una sólida tecnología microfluídica, GCI permite la caracterización de interacciones moleculares en presencia de disolventes no comunes, como acetonitrilo o altas concentraciones de DMSO.
Mediante la medición de la cinética de unión de varios inhibidores de moléculas pequeñas de la anhidrasa carbónica II (CAII), mostramos cómo Creoptix WAVE logra una resolución excepcional para moléculas de fármacos de unión débil pequeñas, para una caracterización cinética completa independientemente de la relación de peso molecular objetivo-analito.
| 1 Furosemida | Ácido 2 4-Sulfamoilbenz | 3 Sulfanilamida | 4 Metilsulfonamida | 5a Acetazolamida | 5b Acetazolamida | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| MW (Da) | 330,74 | 201,20 | 172,20 | 95,12 | 222,25 | 222,25 |
| Nivel immob. (pg/mm2) | 6050 | 6050 | 6050 | 6050 | 6050 | 1450 |
| Datos cinéticos | ||||||
| kon (M-1.s-1) | 3,75 x 1044 | 2,98 x 104 | 2,67 x 104 | 1,15 x 104 | 1,31 x 106 | 1,22 x 106 |
| koff (s-1) | 0,051 | 0,040 | 0,180 | 3,37 | 0,038 | 0,031 |
| km | - | - | - | - | 1,17 x 107 | - |
| Rmáx (Pg/mm2) | 30,87 | 16,91 | 12,09 | 3,79 | 13,25 | 4,59 |
| KD (μm) | 1,4 | 1,3 | 293 | 293 | 0,029 | 0,026 |
| Datos de equilibrio | ||||||
| Rmáx (Pg/mm2) | 33,37 | 14,57 | 11,75 | 3,34 | 14,05 | 4,83 |
| KD (μm) | 2,4 | 3,8 | 6 | 270 | 0,048 | 0,028 |
Tabla 1: Datos cinéticos y de equilibrio de varios inhibidores de moléculas pequeñas de la anhidrasa carbónica II (CAII)
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Figura 1: Cinética de unión de varios inhibidores de moléculas pequeñas de la anhidrasa carbónica II (CAII)
