Dans cette note technique, nous soulignons la sensibilité remarquable du Creoptix WAVE. Grâce au champ de détection étendu sur lequel la technologie d'interférométrie couplée à un réseau (GCI) effectue des mesures, la détermination cinétique à haute résolution est possible même à des réponses très faibles, ce qui peut potentiellement réduire considérablement les coûts de matériel.
Lors de l'analyse sans marquage des interactions moléculaires, la limitation du transport de masse représente une source significative de déviation par rapport à la cinétique de premier ordre. En raison des gradients de concentration d'analyte entre la solution brute et la surface, la limitation du transport de masse est particulièrement prononcée aux niveaux d'immobilisation des ligands à haute densité souvent requis pour générer un signal de liaison mesurable.
Grâce à une technologie exclusive d'interférométrie couplée à un réseau (GCI), le Creoptix WAVE offre une sensibilité supérieure aux méthodologies traditionnelles de résonance plasmonique de surface (SPR), en particulier avec de faibles niveaux d'immobilisation de ligands de protéines faiblement actives. Cela se traduit par une cinétique fiable, même avec des réponses très faibles (Rmax < 1).
En caractérisant l'interaction entre l'acétazolamide et l'anhydrase carbonique II, à l'aide de différentes densités d'immobilisation de l'enzyme, nous montrons que le Creoptix WAVE permet de réduire considérablement la consommation d'échantillon tout en évitant la limitation du transport de masse.
| Niveau de capture de la CAII
(pg/mm2) |
kon (M-1.s-1) |
koff (s-1) |
km |
max
(pg/mm 2 ) |
KD (nM) |
|
|---|---|---|---|---|---|---|
| Données cinétiques, modèle de MTL | 8100 | 1,29 x 106 | 0,0418 | 6,12 x 106 | 18,688 | 32,5 |
| Données cinétiques, modèle 1:1 | 1240 | 0,77 x 106 | 0,0324 | - | 0,469 | 42,3 |
Tableau 1 : données cinétiques pour la liaison de l'acétazolamide à différentes densités d'anhydrase carbonique II (CAII)
Légende : (A) Sensorgrammes montrant l'interaction entre l'acétazolamide (analyte, MM 222,25 Da) et l'anhydrase carbonique II (CAII, ligand, MM 29 kDa) à des densités d'immobilisation faibles et élevées. La CAII a été capturée sur une puce WAVEchip 4PCH à différentes densités d'immobilisation, comme indiqué. Des courbes de dose-effet pour l'acétazolamide ont été enregistrées à chaque niveau d'immobilisation. Le modèle de limitation du transport de masse (MTL) a été utilisé pour ajuster les données du niveau d'immobilisation élevé (à gauche), car l'interaction s'écartait du modèle 1:1 (à droite) à l'aide du logiciel Creoptix WAVEcontrol. (B) Les données montrent que les ajustements cinétiques au niveau d'immobilisation faible ne sont pas limités par le transport de masse, mais qu'ils suivent plutôt la cinétique de premier ordre.
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Figure 1 : liaison de l'acétazolamide à différentes densités d'anhydrase carbonique II (CAII)
