Dans cette note technique, nous expliquons comment le Creoptix WAVE peut être utilisé pour mesurer avec précision la cinétique des taux de dissociation rapides des molécules à faible liaison. Grâce à une conception de cassette qui permet des temps de transition ultrarapides de 150 ms, les hits à faible puissance peuvent désormais être facilement repérés pour une recherche de médicaments plus réussie.
Les liants faibles, comme ceux qui se trouvent dans les bibliothèques de criblage à base de fragments, sont généralement classés par affinité plutôt que par cinétique. En effet, les instruments standard ne sont pas capables de mesurer les taux de dissociation rapides. Cependant, la mesure de l'affinité plutôt que des taux de dissociation peut générer un grand nombre de résultats faussement positifs, ce qui allonge les flux de travail et entraîne des coûts inutiles.
Grâce à une technologie exclusive d'interférométrie couplée à un réseau (GCI), le Creoptix WAVE fournit une résolution de taux de dissociation rapides jusqu'à 10 s-1. Cela permet une sélection précise et précoce de véritables hits pour une efficacité considérablement accrue.
En mesurant la cinétique de liaison du méthylsulfonamide à l'anhydrase carbonique II, nous montrons que le Creoptix WAVEsystem atteint une résolution exceptionnelle à des taux de dissociation extrêmement rapides, même pour les grands rapports de masse moléculaire cible-analyte.
| Données cinétiques | |||
|---|---|---|---|
| Creoptix WAVE | Biacore™ S51 | ||
| kon (M-1 s-1) | 9,36 x 103 | kon (M-1 s-1)
|
8,05 x 103 |
| koff (s-1) | 2,86 | koff (s-1)
|
2,21 |
| KD (uM) | 306 | KD (uM) | 274 |
Tableau 1 : données cinétiques comparées aux données publiées dans Myszka, David G. « Analysis of small-molecule interactions using Biacore S51 technology. » Analytical biochemistry 329.2 (2004): 316-323.
Légende : (A) Sensorgramme de la liaison du méthylsulfonamide (95,1 Da) à l'anhydrase carbonique II (29 kDa) immobilisée par couplage d'amine sur une puce WAVEchip PCH à 8 500 pg/mm2 sur la cellule à circulation 1. Les données ont été acquises à 40 Hz avec un débit de 200 μl/min. (B) Zoom sur la phase d'association (à gauche) et la phase de dissociation (à droite) avec les tracés de distribution résiduelle respectifs ci-dessous montrant la résolution élevée et claire de la cinétique.
![[Figure 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg] Figure 1 TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives.jpg](https://p3.aprimocdn.net/malvernpanalytical/8ddb9b09-3dfd-400a-91e2-ae360106df9b/Figure%201%20TN201101-Creoptix-fast-off-rates-to-reduce-false-positives_Original%20file.jpg)
Figure 1 : liaison du méthylsulfonamide (95,1 Da) à l'anhydrase carbonique II (CAII). 1 pg/mm2 = 1 RU
