Dans cette note technique, nous expliquons comment le Creoptix WAVE peut être utilisé pour surveiller avec précision la cinétique de liaison de grands rapports de masse moléculaire (MM) cible-analyte (> 300:1), grâce au champ de détection étendu sur lequel la technologie d'interférométrie couplée à un réseau (GCI) effectue des mesures pour une sensibilité élevée.
L'analyse en temps réel et sans marquage des interactions entre les petites molécules et les cibles médicamenteuses fournit des informations précieuses pour guider le processus de recherche de médicaments et identifier les candidats médicaments prometteurs. Cependant, de faibles liants et de grands rapports de masse moléculaire (MM) cible-analyte peuvent rendre la caractérisation cinétique extrêmement difficile, car ils nécessitent souvent une sensibilité élevée et la capacité de mesurer en toute confiance les taux de dissociation rapides (koff).
Grâce à une technologie exclusive d'interférométrie couplée à un réseau (GCI), le Creoptix® WAVE offre une sensibilité exceptionnelle permettant de générer des données cinétiques très précises, même à des niveaux de signal faibles. Associée à une technologie microfluidique fiable, la GCI permet de caractériser les interactions moléculaires en présence de solvants peu courants, tels que l'acétonitrile ou des concentrations élevées de DMSO.
En mesurant la cinétique de liaison de différentes petites molécules inhibitrices de l'anhydrase carbonique II (CAII), nous expliquons comment le Creoptix WAVE atteint une résolution exceptionnelle pour les petites molécules médicamenteuses à faible liaison, pour une caractérisation cinétique complète, quel que soit le rapport de masse moléculaire cible-analyte.
| 1 Furosémide | 2 Acide 4-sulfamoylbenzoïque | 3 Sulfanilamide | 4 Méthylsulfonamide | 5a Acétazolamide | 5B Acetazolamide | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| MM (Da) | 330,74 | 201,20 | 172,20 | 95,12 | 222,25 | 222,25 |
| Taux d'immob. (pg/mm2) | 6050 | 6050 | 6050 | 6050 | 6050 | 1450 |
| Données cinétiques | ||||||
| kon (M-1.s-1) | 3,75 x 1 044 | 2,98 x 104 | 2,67 x 104 | 1,15 x 104 | 1,31 x 106 | 1,22 x 106 |
| koff (s-1) | 0,051 | 0,040 | 0,180 | 3,37 | 0,038 | 0,031 |
| km | - | - | - | - | 1,17 x 107 | - |
| Rmax (pg/mm2) | 30,87 | 16,91 | 12,09 | 3,79 | 13,25 | 4,59 |
| KD (μM) | 1,4 | 1,3 | 293 | 293 | 0,029 | 0,026 |
| Données d'équilibre | ||||||
| Rmax (pg/mm2) | 33,37 | 14,57 | 11,75 | 3,34 | 14,05 | 4,83 |
| KD (μM) | 2,4 | 3,8 | 6 | 270 | 0,048 | 0,028 |
Tableau 1 : données cinétiques et d'équilibre de différentes petites molécules inhibitrices de l'anhydrase carbonique II (CAII)
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Figure 1 : cinétique de liaison de différentes petites molécules inhibitrices de l'anhydrase carbonique II (CAII)
