Guide de cinétique – Cinétique de liaison avec le WAVEsystem

Tous les produits Creoptix ont été conçus en pensant à l'expérience utilisateur. Parallèlement, il s'agit d'instruments bioanalytiques très sophistiqués qui nécessitent l'intervention d'un utilisateur qualifié. 

Pour vous aider à tirer le meilleur parti de votre produit, nous avons regroupé toutes nos connaissances internes et notre expérience dans un seul manuel de référence pratique. Nos experts vous guident à travers les grands principes sur lesquels reposent les technologies, techniques et applications. Nous fournissons des informations, des conseils et des astuces sur la conception expérimentale et l'analyse des données. Une section distincte de résolution des problèmes couvre les situations et les problèmes rencontrés le plus souvent par nos équipes du Service clients.

Que vous le lisiez en entier, que vous vous y reportiez pour des questions spécifiques ou que vous le gardiez comme un rappel pratique des équations et des protocoles, nous espérons que ce manuel vous aidera dans votre travail et contribuera à obtenir des résultats qui accélèrent vos découvertes.

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Que contient ce guide ?

Le contenu	Page
1. Bienvenue	5
2. Introduction	7
2.1 Introduction à l'analyse des interactions sans marquage	8
2.1.1 Définitions de la terminologie sans marquage	12
2.1.2 Principes de l'analyse sans marquage	16
2.2 Le WAVEsystem de Creoptix	19
2.2.1 Technologie GCI	19
2.2.3 Microfluidique sans obstruction	21
2.2.3 Comparaison entre la GCI et d'autres technologies de biocapteurs sans marquage	24
2.3 Présentation des applications	26
2.3.1 Analyse des affinités et cinétique	26
2.3.2 Criblage moléculaire	29
2.3.3 Spécificité de liaison	31
2.3.4 Analyse de la concentration	32
3. Conception expérimentale	34
3.1 Surfaces du capteur	35
3.1.1 Sélection du type de puce	35
3.1.2 Conditionnement de la puce	40
3.1.3 Stratégies d'immobilisation	41
3.1.4 Régénération de surface	51
3.1.5 Régénération du ligand	53
3.2 Immobilisation du ligand	56
3.2.1 Densité du ligand	56
3.2.2 Activité du ligand	59
3.2.3 Limitation du transport de masse	60
3.2.4 Avidité du ligand	61
3.2.5 Liaison non spécifique	62
3.3 Tampon	63
3.3.1 Considérations générales	63
3.3.2 Composition du tampon	63
3.3.3 Correspondance tampon/échantillon	67
3.4 Référencement et correction	69
3.4.1 Référencement	69
3.4.2 Double référencement	69
3.4.3 Correction du DMSO (correction du solvant)	70
3.5 Format de l'essai	75
3.5.1 Analyse des affinités et cinétique	75
3.5.2 Criblage moléculaire	84
3.5.3 Expériences de compétition et spécificité de liaison	85
3.5.4 Analyse de la concentration	87
3.5.5 Récupération de l'échantillon pour l'identification des liants d'analytes	91
4. Analyse des données	97
4.1 Ajustement des données	98
4.1.1 Sauts de signal	99
4.1.2 Décalages	99
4.1.3 Correction du DMSO (correction du solvant)	100
4.1.4 Blancs	101
4.2 Évaluation des données	102
4.2.1 Qualité et résultat de l'évaluation	103
4.2.2 Paramètres et menu avancé	105
4.2.3 Sélection du modèle	109
4.2.4 Analyse de l'équilibre	116
4.3 waveRAPID	117
4,4. Écran	119
4.4.1 Paramètres	119
4.4.2 Série de données de tracés	119
4.4.3 Classement/résultats	120
4.4.4 Analyses de la vitesse de dissociation	120
5. Dépannage	122
5.1 Fuite	123
5.2 État de l'appareil	123
5.3 Signal déformé	124
5.3.1 Signal bruyant	124
5.3.2 Amplitudes instables/faibles	125
5.3.3 Pertes de phase/pics de signal	126
5.4 Immobilisation du ligand	127
5.4.1 Faible liaison	127
5.4.2 Faible activité du ligand	128
5.5 Cinétique	128
5.5.1 Pas de signal suprastœchiométrique/saturation	128
5.5.2 Pas d'association linéaire/de signal de dissociation	129
5.5.3 waveRAPID	129
6. Références	130